WHATMAN 4057-200 DE-52纤维素 2KG装 停产多年，将于18年下半年重新供应中国市场

纤维素DE-52为中等碱性阴离子交换剂，柱层析用于吸附剂，用以分离提纯多糖、肽、核苷酸、酶、血清组分和病毒等各种生物高分子。

纤维素DE-52提取法纯化多克隆抗体

该法提取IgG简便，既可小量提取，也可大量制备。

1．批量提取法 称取DEAE-纤维素(DE52)50g，置于1000ml烧杯中，先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸盐缓冲液(PB)平衡。将水分抽干，或用布氏滤斗(内放两层滤纸)过滤，收集湿纤维素，以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52，经过充分搅拌，置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次，即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便，既可小量提取，也可大量制备。

2．Tris-Cl离子交换层析法(Ion-exchange chromatography)

【材料和试剂】

（1）DE52纤维素。

（2）HCl；NaOH；0.01～0.05mol/L，pH8.0 PB；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5mol/L NaCl。

（3）待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。

（4）1.5×50cm 层析柱；透析袋；紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。

【操作步骤】   Cellulose DE-52 DEAE 纤维素 DE-52

（1）DE52纤维素的处理：DE52经酸、碱处理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。

（2）装柱：将层析柱固定于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱，出口接一细塑料管并关闭出水。将浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高时，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松开出水口螺旋夹，控制流速1～2ml/min，同时连续加入DE52至所需高度。待DE52完全沉降后，柱面放一圆形滤纸片。

（3）平衡：松开出水口螺旋夹，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速为15滴/min，待流出液与洗脱液之pH值达到一致时，停止平衡。

（4）待提取样品的准备：将蛋白装入透析袋里，置4℃冰箱，对0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析。

（5）加样、洗脱与收集：用吸管吸去柱面液体，以毛细吸管沿柱壁加入样品，样品体积相当于柱床体积的1%～2%，蛋白浓度为50～70mg。启开出水口螺旋夹使样品缓慢进入柱床内，并用少量洗脱液清洗柱壁；待液体进入柱床后，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脱，控制流速为14～16滴/min。分部收集器收集，紫外监测，或人工收集，以紫外分光光度计分别测定每管280nm OD值，描绘洗脱液峰。

（6）浓缩：将洗脱液的280nm OD上峰段与下峰段各管分别合并，装入透析袋，以PEG浓缩至所需体积。

Tris-PO4离子交换层析法

该法在上述方法的基础上稍加改良，即通过梯度洗脱，可用于血清中IgG和IgM的提取。

应用文献

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究 杨汉春《中国兽医杂志》 , 1995 (2) :3-5

用DE-52纤维素柱层析纯化柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子 王建民《黑龙江畜牧兽医》 , 2013 (14) :88-89

人工栽培灵芝中多糖的部分理化性质及免疫调节作用 熊川《微生物学通报》 , 2018 , 45 (4) :825-835

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化  董文霞 《食品工业科技》 , 2018 (4)

发酵苹果渣多糖分离纯化、结构及其与加工特性的关系 陕西师范大学 贾丰 中国农业科学 2017 10期50卷

九华山黄精多糖的分离纯化及化学表征 张庭廷 安徽师范大学 食品科学 2011年10期32卷